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SKC微生物采樣器的分類
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SKC空氣采樣器有很多款,下文介紹一些采樣器的分類。

采樣器

 

沖擊器和旋風分離器

狹縫采樣器和安德森6級采樣器以及旋風分離器等沖擊器已用于采樣空氣傳播的病毒。它們是有源采樣器,需要真空泵來吸入氣溶膠,并且進入的氣流中的顆粒會通過小噴嘴(以孔或縫的形式)加速。當它們被拉過這些設(shè)備時,具有高慣性的粒子會撞擊到收集介質(zhì)的表面。然后,收集培養(yǎng)基中回收和它們的等分試樣用于病毒分離或其它分析。例如,使用帶有液體收集介質(zhì)的高分辨率狹縫采樣器收集空中傳播的嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒; 在這項工作中,盡管10個樣本中有2個為RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng))陽性,但所有病毒培養(yǎng)均為陰性。產(chǎn)生負面結(jié)果的原因可能是空氣中存在的病毒水平較低,或者這些設(shè)備不足以對霧化的病毒進行采樣。共同撞擊的設(shè)計的實際限制限制了小的截止大小(粒徑用50%的收集效率)為0·2-0·3  μ微米。例如,為了收集30nm的顆粒,63的噴嘴尺寸 μ是必需的M(這是非常具有挑戰(zhàn)性的制造)以聲速運行(這有損于病毒)。

旋風分離器在顆粒上施加離心力,使它們偏離氣流并撞擊到收集壁上。它們不是設(shè)計為高效率(> 95%)為采樣大小范圍從10nm至大于10  μ米; 收集效率是30-90%為PM 10(顆粒物質(zhì)≤10  μ M)和用于PM 0-40%2·5 (顆粒物≤2·5  μ米)的傳統(tǒng)的單級旋風。但是,游離病毒顆??赡苄∮?00 nm,因此無法有效收集。常規(guī)旋風采樣器的改進在某種程度上改善了其性能。由國家職業(yè)安全與健康研究所(NIOSH)開發(fā)的一個采樣器是一種多級旋風分離器,其工作流量為3·5 l min -1:先收集15 ml的試管氣溶膠顆粒> 4  μ m時,第二個是1·5毫升管一個1和4之間收集顆粒 μ m和第三個是一個聚四氟乙烯(PTFE)過濾器,其捕獲那些<1  μ微米。Cao等人使用此采樣器在沉降室內(nèi)收集實驗室產(chǎn)生的甲型H1N1流感病毒氣溶膠。發(fā)現(xiàn),通過RT-PCR測量的總收集病毒數(shù)量的收集效率與通過SKC BioSampler(被認為是行業(yè)標準)采樣15分鐘所獲得的效率相同。但是,以BioSampler為參考,NIOSH旋風分離器收集到的病毒中只有34%仍然具有傳染性,這可能是由于干燥引起的。Blachere。在醫(yī)院急診室中使用了NIOSH氣旋來收集空氣傳播的流感病毒。他們發(fā)現(xiàn),通過RT-PCR在81個樣本中的11個中檢測到了甲型流感病毒(IAV)RNA,并且包含該病毒的氣溶膠顆粒中有一半以上<  m,在可吸入顆粒尺寸范圍內(nèi)(吸入的顆粒能夠通過纖毛氣道)。

液體氣旋收集器也已用于病毒氣溶膠采樣,其中液體介質(zhì)會移出然后收集被困在氣旋壁上的顆粒。在一項研究中,液體旋風收集器和安德森級聯(lián)撞擊器(ACI)用于受感染的豬(產(chǎn)生收集霧化IAV,豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬流行性腹瀉病毒顆粒阿隆索等人。。來自這兩種設(shè)備的收集介質(zhì)的等分試樣用于細胞培養(yǎng)物中的RT-PCR和病毒分離。在該研究中發(fā)現(xiàn)了所有三種病毒,并且在旋風分離器或ACI收集的樣品中,幾何平均顆粒濃度沒有差異。盡管旋風分離器設(shè)計的進步,切斷尺寸為這些設(shè)備(主要是> 1  μ M)不能滿足小尺寸的含病毒顆粒的采樣要求。而且,從旋風器的動作造成物理損壞可以停用病毒,導致收集的感染性病毒被低估。

使用ACI的主要優(yōu)點是能夠收集包含不同粒度范圍的病毒的顆粒。對于顆粒> 1  μ m時,ACI或類似的裝置是用于選擇性粒度采樣主采樣器。但是,對于狹縫采樣器和旋風分離器,ACI依靠后過濾器(放置在撞擊器的下游)來收集細顆粒。另外,它的壁損失(顆粒沉積在內(nèi)壁表面上,而不是的收集介質(zhì)上)相當可觀。

液體沖擊器

液體撞擊器是收集霧化病毒常用的采樣器,因為液體收集介質(zhì)有助于維持病毒的生存力,并且通常可以直接用于斑塊分析等分析方法,而無需從表面提取病毒或過濾器。但是,某些用于細菌和真菌的收集介質(zhì)不適用于病毒。例如,礦物油是非營養(yǎng)性的,因此不支持微生物的復制,但仍能使它們保持生命(這對于準確枚舉所收集的微生物很重要),不能用于病毒。當用于細菌和真菌時,將礦物油收集的微生物混合物過濾通過0·45‐ μ過濾器和殘留在過濾器上的微生物可通過將其沖洗到容器中來回收。病毒,通過所需要的病毒(如0·22-小孔徑濾波器濾波礦物油μ米過濾器)需要過多的壓力將被損壞到病毒。

常用的液體撞擊器包括全玻璃撞擊器(AGI)和BioSampler。AGI通過迫使氣流在瓶子內(nèi)突然改變方向來工作。在該采樣過程中,形成空氣的在瓶口上一方面內(nèi)部的液體收集介質(zhì)氣泡增加了通過擴散小顆粒的收集效率,同時在另一方面引起的收集病毒reaerosolization; Riemenschneider酒店。BioSampler通過(i)小化顆粒反彈和再氣溶膠化的影響以及(ii)延長其采樣時間而又保留了所收集的微生物的活力來改善AGI-30。它通過沉積顆粒到在渦旋運動的收集介質(zhì)通過三個0·630毫米切向噴嘴以聲速,產(chǎn)生波長約300的截止尺寸。BioSampler被Anderson等人使用。研究了五個豬場在夏季和秋季/冬季的IAV。他們發(fā)現(xiàn)豬的IAV脫落在兩個季節(jié)都發(fā)生,但是這些霧化病毒的檢測取決于氣候條件或飼養(yǎng)管理等因素。BioSampler還用于收集人體模型靶標吸入的IAV和活禽市場中的IAV(Kang)。在前一項研究中未檢測到流感病毒RNA,可能是由于距病毒源較遠的病毒濃度較低或人體模型暴露時間相對較短,而在后者的研究中在氣溶膠樣品中發(fā)現(xiàn)了禽流感病毒核酸。

AGI‐4,AGI‐30(數(shù)字是指孔口到燒瓶底部的距離,單位為毫米)和BioSampler已用作參考采樣器。盡管其液體收集介質(zhì)可直接用于分子分析技術(shù)(例如PCR或酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA))的優(yōu)勢,但仍需進一步評估其作為參考的用途。首先,它們的0·9-cm的入口被設(shè)計成模仿人類上呼吸道系統(tǒng)在從空氣流中除去大顆粒。入口效率,定義為在環(huán)境空氣進入所述采樣到的顆粒的部分,是為1- 98%以上μ m個粒子,但顯著降低到80%左右為5  μ m個基于在生產(chǎn)商推薦的試驗流的12·5升min的速率-1。為5- 20%觀察到損耗μ m個粒子不進入采樣權(quán)證在其使用提醒用于采樣較大含病毒顆粒。其次,Han和Mainelis發(fā)現(xiàn)沉積顆粒(熒光聚苯乙烯乳膠(PSL))和枯草芽孢桿菌細胞和芽枝狀枝孢孢子的BioSampler的內(nèi)壁高達30%和reaerosolization率范圍從0·2%至6·9%。對于AGI-30,Riemenschneider等人。發(fā)現(xiàn),隨著流速的增加,MS2噬菌體的再氣溶膠化(單個病毒粒子粒徑?28 nm)也增加。此外,霍根。發(fā)現(xiàn)AGI-30,BioSampler和熔塊起泡器對噬菌體MS2和T3(單個病毒體粒徑?45 nm)的收集效率在20-100 nm的粒徑范圍內(nèi)低于10%。BioSampler和AGI-30的50%截止尺寸在12·5 l min -1時均為300 nm 。由于通過擴散和維持病毒感染力進行收集,BioSampler的8 l min -1對MS2氣溶膠采樣更為有效。雖然通過擴散收集的流量在低流速下會增強,但流速降低會導致依賴慣性的物理收集效率降低。因此,應(yīng)謹慎行事,以進一步降低流速,并有必要進行研究以確定采樣空氣傳播病毒的流速。后,BioSampler高離心力也滅活流感病毒的一個顯著分數(shù)。因此,迫切需要一種新型的空氣傳播病毒采樣器,以便在較大范圍的含病毒顆粒中進行較少暴力但有效的采樣。

還對這些撞擊物進行了改良,以試圖提高其對含有傳染原的顆粒的收集效率。一種改進的活塞式機械的肺活量計,它被用作蓄能室呼出或咳嗽氣霧劑,與BioSampler相結(jié)合,被用于咳嗽和呼氣期間收集流感病毒。溫度控制或相對濕度(RH)控制的AGI-30和被用于采樣含有細菌氣溶膠過濾器。與傳統(tǒng)采樣器相比,這些改進的采樣器實現(xiàn)了相對更高的采集效率,尤其是在條件下(干燥或寒冷的條件下),因為采樣環(huán)境會導致微生物失活。其中一些經(jīng)過改進的采樣器尚未經(jīng)過空氣傳播病毒收集的測試,但是已經(jīng)積極地進行了標準生物氣溶膠采樣器用于病毒收集的修改。

空氣傳播病毒普通采樣器的優(yōu)缺點對比

篩選器

鑒于含病毒的氣溶膠的粒徑范圍很廣,而撞擊器或撞擊器對小于500 nm的顆粒效率較低,因此過濾器被廣泛用于采樣空氣傳播的病毒。過濾器的收集機制包括攔截,慣性碰撞,擴散和靜電吸引。PTFE和纖維素過濾器已用于采樣含病毒的氣溶膠。在這些研究中檢測到了機載鼻病毒RNA,低致病性禽流感病毒RNA和VZV DNA。然而,過濾過程很可能脫水病毒采樣; 同樣,采樣后從過濾器中提取收集到的病毒會導致大部分收集到的病毒失活。Fabian。報道,與BioSampler相比,特富龍和明膠過濾器分別僅回收了22%和10%的傳染性流感病毒。Li。評估了5 ml BioSampler,明膠過濾器和玻璃纖維過濾器用于收集H1N1流感病毒的性能,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)被捕獲的病毒失活是從過濾器中提取病毒的結(jié)果。同樣,Li等人以BioSampler作為參比樣品,比較了使用氧化鋁納米纖維玻璃纖維過濾器獲得的MS2噬菌體的相對提取效率; 納米纖維過濾器的提取效率低于10%,而玻璃纖維過濾器的提取效率則在32·3%至162%之間變化。

在常用的過濾器中,明膠過濾器是*的,因為它可以溶解在液體中以在細胞培養(yǎng)物中進行分子或病毒計數(shù),而不會顯著影響許多病毒的生存能力。趙。評估了四個采樣器(帶有明膠過濾器的六級ACI,AGI-30,OMNI-3000和MD8)的霧化傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的收集,發(fā)現(xiàn)明膠過濾器具有100%的物理收集效率而沒有顯著影響脫水效應(yīng),可能是由于IBDV的“抗壓性”所致。明膠過濾器對活的親水性病毒的收集效率比核孔聚碳酸酯過濾器的收集效率高10倍,因為許多親水性病毒需要水合才能保持活力。然而,明膠過濾器仍然存在采樣和提取問題。Fabian。使用明膠過濾器回收了總有生命的IAV的23%,而在臺式病毒加標回收實驗中,可從BioSampler中回收了100%。一個簡單的系統(tǒng)由一個便攜式MD8空氣采樣器組成,該系統(tǒng)通過軟管連接到明膠過濾器上,用于捕獲咳嗽氣溶膠中的流感病毒,盡管據(jù)報道病毒失活是一個問題。采樣條件對于在明膠過濾器上成功收集病毒非常重要。相對濕度低會導致病毒干燥,相對濕度高會導致明膠過濾器溶解。這些過濾器必須的時間(<15分鐘的采樣時間)短周期中使用,因為它們很快變干,然后在較高溫度下熔化它們。因此,過濾器收集的病毒通常比分子分析更適合用于分子分析,因為干燥,提取和后采樣過程會滅活大部分感染性病毒。

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